利用凝膠成像系統進行DNA含量測定

                  在一些分子生物學實驗過程中, 如質粒酶切, 基因片段與載體的連接、基因轉染等往往需要對操作的 DNA分子進行定量。 DNA分子定量方法很多 , 并在不斷發展中。其中建立在熒光 DNA分析基礎上的凝膠成像分析系統由于操作簡便、直接、節省DNA分子等特點,得到廣泛應用。
                   
                  利用凝膠成像系統進行 DNA含量測定 ,主要根據 DNA條帶灰度值與 DNA含量成一定的相關性。采用已知的 DNAMarker含量與相應的灰度值來估算在同一凝膠上的未知的 DNA含量[ 4] 。由于凝膠成像系統檢測的電泳條帶的灰度值在 0—255之間 , 當含量超過或低于一定含量時, 雖然含量相差很多 , 但相應的灰度值沒有顯著的差異, 使測定的 DNA含量與實際值相差很多。所以在進行 DNA定量時要求所測得的灰度值與相對應的 DNA含量處于一個高度分辨區。
                   
                  本研究通過對凝膠電泳圖像上的 DNA灰度值與 DNA含量的相關性分析結果表明:(1)DNA灰度值與 DNA含量呈正相關關系 , 但不成正比關系。(2)DNA灰度值與 DNA含量在一定范圍內呈現良好的線性關系。在圖 1A的電泳圖像 DNA含量為484 ng、242 ng、121 ng、60.5 ng時, 而在圖 1B的電泳圖像 DNA含量為 50ng、66.8 ng、83.5 ng、100ng、200 ng時, 與相應的灰度值可以建立良好線性關系 R2 為 0.9971。根據這種線性關系 , 可以判斷出同一凝膠電泳圖 DNA的檢測范圍。 (3)應用已知含量DNA灰度值與含量在一定范圍內呈現良好的線性關系可以較準確地計算出同一凝膠電泳圖譜上未知DNA的含量 , 但需要未知含量 DNA的灰度值處于已知建立良好線性關系不同濃度 DNA相對應的灰度值之間。
                   
                  利用凝膠成像系統進行 DNA含量測定 ,需要明確測定的 DNA含量范圍, 在這一范圍內 DNA含量與灰度值成良好的線性關系。 通過對已知含量DNA灰度值與 DNA含量之間能夠建立良好線性關系的 DNA范圍的判定, 可以明確在同一凝膠圖像上未知含量 DNA的檢測范圍, 并根據建立的線性關系 ,計算出未知含量 DNA的含量。
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